ELISA試劑盒包被原的性質(zhì)很重要，蛋白濃度，是不是降解，這到你做出的抗體可不能夠被其辨認(rèn)，所以保管抗原很重要，我做重組蛋白時(shí)，師兄都嚴(yán)厲正告我必定要在冰浴下緩慢消融即是這個(gè)道理。還有有的包被原能夠不是蛋白，關(guān)于生物素和脂類物質(zhì)或小分子物質(zhì)咱們要事前對(duì)其改造再加以包被，列出如下:
①親和素生物素:先親和素先包被載體，參加生物素化的DNA，這種包被辦法均勻、結(jié)實(shí)，已擴(kuò)展應(yīng)用于各種抗原物質(zhì)的定量測(cè)定。
②脂類物質(zhì):可將其在有機(jī)溶劑（例如乙醇）中溶解后參加ELISA板孔中，開蓋置冰箱或涼風(fēng)吹干，待酒精蒸發(fā)后，讓脂質(zhì)天然干固在固相外表。
③小分子有必要*和大的蛋白載體偶聯(lián)后才干固定在固相載體上。
包被液的挑選，一般挑選ph9.6的碳酸鹽緩沖液。但有時(shí)因?yàn)閷?shí)驗(yàn)的需求，包被原的特殊性也能夠選用中性的緩沖溶液來(lái)包。應(yīng)注意以下原理：因?yàn)榈鞍踪|(zhì)與聚苯乙烯固相載體是經(jīng)過(guò)物理吸附的，靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團(tuán)與固相載體外表的疏水基團(tuán)間的效果，這種物理吸附對(duì)錯(cuò)特異性的，受蛋白質(zhì)的分子量、等電點(diǎn)、濃度等的影響，大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)一般富含更多的疏水基團(tuán)，故更易吸附到固相載體外表。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)還要有鞏固的理論外也要實(shí)習(xí)，看一下結(jié)尾可不能夠應(yīng)用到自個(gè)實(shí)驗(yàn)當(dāng)中去。常用的包被液除了方才說(shuō)到的pH9.6碳酸鹽緩沖液，還有pH7.2的磷酸鹽緩沖液和pH7-8的Tris-HCL緩沖液等等。
ELISA試劑盒關(guān)閉：繼包被之后用高濃度的無(wú)關(guān)蛋白質(zhì)溶液再包被的進(jìn)程。關(guān)閉即是讓很多不相關(guān)的蛋白質(zhì)充填這些空地，然后排擠ELISA后的過(guò)程中攪擾物質(zhì)的再吸附。常有：0.05%-0.5%的小牛血清或1%明膠;脫脂奶粉，對(duì)比價(jià)廉，能夠高濃度運(yùn)用（5%-10%）;還有一些稀有用到的各種動(dòng)物血清（首要為了掃除類似蛋白攪擾）和酪蛋白等等。ELISA試劑盒但結(jié)尾選用啥，要根據(jù)實(shí)驗(yàn)詳細(xì)來(lái)實(shí)習(xí)。