設(shè)為主頁(yè)  |  加入收藏
新聞動(dòng)態(tài)
·嗅覺受體家族5亞基3抗體12.12年終盛典
·婆羅門牛皮膚成纖維樣細(xì)胞;BOS-3雙十二優(yōu)惠活動(dòng)
·標(biāo)準(zhǔn)雞血清(無(wú)菌 未經(jīng)滅活)感恩節(jié)活動(dòng)
·人橫紋肌肉瘤細(xì)胞十一月優(yōu)惠活動(dòng)
·大鼠角膜上皮細(xì)胞試劑盒?雙十一優(yōu)惠活動(dòng)如火如荼地進(jìn)行中
·MC3T3-E1 Subclone 14小鼠顱頂前骨細(xì)胞亞克隆優(yōu)惠活動(dòng)
·兔基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1elisa檢測(cè)試劑盒試劑優(yōu)惠活動(dòng)
產(chǎn)品搜索
產(chǎn)品目錄
ELISA試劑盒
細(xì)胞
血清
培養(yǎng)基
生化試劑
標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
抗體
ATCC細(xì)胞
PCR試劑盒
elisa檢測(cè)試劑盒
質(zhì)粒
定量PCR試劑盒
細(xì)胞培養(yǎng)
聯(lián)系我們
聯(lián)系我們
上海一研生物科技有限公司
地址:上海嘉定區(qū)澄瀏公路52號(hào)
電話:021-69985169
郵編:201102
傳真:
聯(lián)系人:高麗琴
手機(jī):13611928337
技術(shù)文章
·HEL人紅白細(xì)胞白血病細(xì)胞操作注意事項(xiàng)(續(xù))
·牛血清白蛋白Ⅴ 9048-46-8的溶解度和穩(wěn)定性
·大鼠可溶性Toll樣受體2(sTLR2)ELISA免費(fèi)代測(cè)試劑盒樣本處理及要求
·脫纖維驢血(無(wú)菌 pet瓶裝)操作步驟
·小鼠晶狀體上皮細(xì)胞提取物實(shí)驗(yàn)通用規(guī)則
 
 
資料下載 Down 您現(xiàn)在的位置:首頁(yè) > 資料下載

胡桃源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒

點(diǎn)擊次數(shù):365 發(fā)布時(shí)間:2024/9/6
提 供 商: 上海一研生物科技有限公司 資料大小:
圖片類型: 下載次數(shù): 0 次
資料類型: OCX 瀏覽次數(shù): 365 次
相關(guān)產(chǎn)品:
詳細(xì)介紹: 文件下載    

        胡桃源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒說明書

使用方法:

測(cè)定法的靈敏度來(lái)自作為報(bào)告的酶。酶是一種有機(jī)催化劑,很少量的酶即可誘導(dǎo)大量的催化反應(yīng),產(chǎn)生可供觀察的顯色反應(yīng)現(xiàn)象。因此該體系常被稱為酶放大體系。

1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。   24μg/ml    5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

 12μg/ml    4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

 6μg/ml     3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

 3μg/ml     2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

 1.5μg/ml   1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

2. 加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。|

3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   

4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。

7. 溫育:操作同3。

8. 洗滌:操作同5。

9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

11. 測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。


熒光定量PCR檢測(cè)方法包括以下步驟:

(1)將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接,克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上,構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品,并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線;

(2)待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后,目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù),計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值,即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。

其中步驟(1)為:將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接,克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上,構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品,并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因,較佳地管家基因,地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域,其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體,較佳地為PCR克隆載體,地為TA cloning載體,所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1:1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測(cè)目的基因與參照基因的比例為1:1,解決了目前相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題,提高HER2基因擴(kuò)增檢測(cè)的可靠性。

步驟(2)為:待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后,目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù),計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值,即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。

其中所述待測(cè)目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測(cè)目的基因,較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因,更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域,所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法,所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增,更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。


實(shí)驗(yàn)規(guī)則:


1、要保證移液槍的準(zhǔn)確性,誤差不能超過2%??捎盟碗娮犹炱竭M(jìn)行確定。但有專業(yè)人員進(jìn)行矯正。

2、要配備20ul、50ul、100ul、1000ul和排槍各一支。吸取不同的液體后,要更換槍頭。即使是吸取標(biāo)準(zhǔn)品時(shí)。

3、要在實(shí)驗(yàn)前1小時(shí)將試劑盒從冰箱中取出,使各種試劑都恢復(fù)到室溫,以使結(jié)果更穩(wěn)定。

4、實(shí)驗(yàn)時(shí),要使底物避光保存。

5、用槍吸取液體時(shí)速度不能太快,以免產(chǎn)生氣泡而使吸取量不準(zhǔn)確。

6、吸取液體時(shí),要用量程和需要量接近的槍去吸,減少誤差。

7、將液體加到酶標(biāo)孔中時(shí),避免槍頭和孔內(nèi)液體接觸,可使槍頭上的液滴和孔壁接觸,液滴會(huì)自然流下去。

8、液體全部加完后,可將酶標(biāo)板在桌子上平行輕輕晃動(dòng)30秒,混勻液體。也可以用酶標(biāo)儀的晃動(dòng)功能。

9、應(yīng)盡量做雙孔實(shí)驗(yàn),這樣才能保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。

10、對(duì)結(jié)果有疑問的樣品要用其它方法進(jìn)行確證。


實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):


1)RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況;


2)客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào);


3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。


4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。


實(shí)時(shí)熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,*通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來(lái)指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來(lái)指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量(包括*定量和相對(duì)定量)和定性分析。


主要服務(wù):DNA或RNA的*定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。


主要技術(shù):引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR。


 
本站推薦產(chǎn)品:主營(yíng)產(chǎn)品:PCR檢測(cè)試劑盒、PCR試劑盒, 核酸檢測(cè)試劑盒,熒光定量檢測(cè)試劑盒,生化試劑盒 ,比色法試劑盒,酶活性檢測(cè)試劑盒,ELISA試劑盒,酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒,試劑盒,ELISA試劑盒,抗體,重組蛋白,分光光度法檢測(cè)試劑盒,細(xì)胞株,原代細(xì)胞,細(xì)胞培養(yǎng)基,標(biāo)準(zhǔn)溶液產(chǎn)品。代理并銷售進(jìn)口SIGMA試劑、abcam抗體、R&D抗體、CST抗體、ATCC細(xì)胞、BD公司、GE公司公司產(chǎn)品。
上海一研生物科技有限公司(www.taobaoyq.com) 版權(quán)所有 總訪問量:407993 地址:上海嘉定區(qū)澄瀏公路52號(hào) 郵編:201102
電話:021-69985169 傳真: 手機(jī):13611928337 聯(lián)系人:高麗琴 郵箱:3004994300@qq.com
技術(shù)支持:智慧城市網(wǎng) 管理登陸 ICP備案號(hào):滬ICP備14030958號(hào)-5
在線客服
021-69985169
13611928337
點(diǎn)擊這里給我發(fā)消息
點(diǎn)擊這里給我發(fā)消息
 

智慧城市網(wǎng)

推薦收藏該企業(yè)網(wǎng)站