設為主頁  |  加入收藏
新聞動態(tài)
·嗅覺受體家族5亞基3抗體12.12年終盛典
·婆羅門牛皮膚成纖維樣細胞;BOS-3雙十二優(yōu)惠活動
·標準雞血清(無菌 未經滅活)感恩節(jié)活動
·人橫紋肌肉瘤細胞十一月優(yōu)惠活動
·大鼠角膜上皮細胞試劑盒?雙十一優(yōu)惠活動如火如荼地進行中
·MC3T3-E1 Subclone 14小鼠顱頂前骨細胞亞克隆優(yōu)惠活動
·兔基質金屬蛋白酶抑制因子1elisa檢測試劑盒試劑優(yōu)惠活動
產品搜索
產品目錄
ELISA試劑盒
細胞
血清
培養(yǎng)基
生化試劑
標準品/對照品
抗體
ATCC細胞
PCR試劑盒
elisa檢測試劑盒
質粒
定量PCR試劑盒
細胞培養(yǎng)
聯(lián)系我們
聯(lián)系我們
上海一研生物科技有限公司
地址:上海嘉定區(qū)澄瀏公路52號
電話:021-69985169
郵編:201102
傳真:
聯(lián)系人:高麗琴
手機:13611928337
技術文章
·鳥源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒?檢測方法步驟
·HEL人紅白細胞白血病細胞操作注意事項(續(xù))
·牛血清白蛋白Ⅴ 9048-46-8的溶解度和穩(wěn)定性
·大鼠可溶性Toll樣受體2(sTLR2)ELISA免費代測試劑盒樣本處理及要求
·脫纖維驢血(無菌 pet瓶裝)操作步驟
 
 
技術文章 Article 您現(xiàn)在的位置:首頁 > 技術文章
對于貼壁細胞傳代可以參考的方法
點擊次數(shù):364 更新時間:2024-05-29

對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加入0.25%(w / v)-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細胞可以適當延長消化時間),然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。

3. 輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力,后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行。

3)細胞凍存: 收到細胞后建議在培養(yǎng)3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。下面T25瓶為例;

1. 細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中,可使用血球計數(shù)板計數(shù),來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個活細胞/ml.

2. 1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ,按每1ml凍存液含1×106~1×107個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中,標注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

3. 將要凍存的細胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過夜,之后轉入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

細胞處理


1) 凍存細胞的復蘇::

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。



本站推薦產品:主營產品:PCR檢測試劑盒、PCR試劑盒, 核酸檢測試劑盒,熒光定量檢測試劑盒,生化試劑盒 ,比色法試劑盒,酶活性檢測試劑盒,ELISA試劑盒,酶聯(lián)免疫檢測試劑盒,試劑盒,ELISA試劑盒,抗體,重組蛋白,分光光度法檢測試劑盒,細胞株,原代細胞,細胞培養(yǎng)基,標準溶液產品。代理并銷售進口SIGMA試劑、abcam抗體、R&D抗體、CST抗體、ATCC細胞、BD公司、GE公司公司產品。
上海一研生物科技有限公司(www.taobaoyq.com) 版權所有 總訪問量:407993 地址:上海嘉定區(qū)澄瀏公路52號 郵編:201102
電話:021-69985169 傳真: 手機:13611928337 聯(lián)系人:高麗琴 郵箱:3004994300@qq.com
技術支持:智慧城市網(wǎng) 管理登陸 ICP備案號:滬ICP備14030958號-5
在線客服
021-69985169
13611928337
點擊這里給我發(fā)消息
點擊這里給我發(fā)消息
 

智慧城市網(wǎng)

推薦收藏該企業(yè)網(wǎng)站