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大鼠高敏甲狀腺素(u-T4)ELISA試劑盒?實驗注意事項
點擊次數:445 更新時間:2022-11-09

大鼠高敏甲狀腺素(u-T4)ELISA試劑盒實驗注意事項:

1)ELISA實驗時,應分別以陽性對照與陰性對照控制實驗條件,待檢樣品應一式二份,以保證實驗結果的準確性。有時本底較高,說明有非特異性反應,可采用羊血清、兔血清等封閉。

2)在ELISA實驗中,進行各項實驗條件的選擇是很重要的,其中包括:

(1)ELISA實驗固相載體的選擇:許多物質可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等,形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。

目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管選擇何種載體,在使用前均可進行篩選:用等量抗原包被,在同一實驗條件下進行反應,觀察其顯色反應的均一性,據此判明其吸附性能。

(2)ELISA實驗包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時,要求純度要好,吸附時一般要求pH在9.0-9.6之間。吸附溫度,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4 ℃18-24 h。蛋白質包被的zui適濃度需進行滴定:即用不同的蛋白質濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進行包被后,在其它實驗條件相同時,觀察陽性標本的OD值。選擇OD值zui大而蛋白量zui少的濃度,對于多數蛋白質來說通常為1-10μg/ml。

(3)ELISA實驗中酶標記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA實驗法進行初步效價的滴定。然后再固定其它條件或采取“方陣法"(包被物、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度)在正式ELISA實驗系統里準確地滴定其工作濃度。

(4)ELISA實驗中酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯的顯色反應,而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,應注意防護。有條件者應使用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后,應加入強酸或強堿以終止反應。通常底物作用時間,以10-30 min為宜。底物使用液必須新鮮配制,尤其是H2O2在臨用前加入。

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