羊源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒操作步驟: (1)將參照基因與待測目的基因片段等比例連接,克隆到同一個質粒載體上,構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品,并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線; (2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后,目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數,計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值,即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。 其中步驟(1)為:將參照基因與待測目的基因片段等比例連接,克隆到同一個質粒載體上,構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品,并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。 其中所述參照基因為本領域常規參照基因,較佳地管家基因,優選地為RPPH1的擴增區域,其中所述質粒載體為本領域常規質粒載體,較佳地為PCR克隆載體,優選地為TA cloning載體,所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1:1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1,解決了目前相對標準曲線法應用中目的基因與參照基因的濃度比例關系難以控制的問題,提高HER2基因擴增檢測的可靠性。 步驟(2)為:待測樣本與步驟(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后,目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數,計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值,即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。 其中所述待測目的基因為本領域常規待測目的基因,較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因,更佳地為HER2基因的擴增區域,所述熒光定量PCR擴增為本領域常規熒光定量PCR擴增方法,所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增,更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。 小鼠神經干細胞(EGFP標記) 人腦微血管內皮細胞 人腦血管平滑肌細胞 人海馬神經元 人少突膠質細胞 人星形膠質細胞 小鼠成纖維細胞(EGFP標記) mCF, 小鼠心臟成纖維細胞 MN-c, 小鼠皮質神經元 MN-h, 小鼠海馬神經元 MSC, 小鼠雪旺細胞 MA, 小鼠星形膠質細胞 MLF, 小鼠淋巴成纖維細胞 mRTEC, 小鼠腎小管上皮細胞 CSC, 小鼠心肌細胞 mEPC, 小鼠內皮祖細胞-骨髓 MEF, 小鼠胚胎成纖維細胞 NSC,大鼠神經干細胞 RN-h, 大鼠海馬趾神經元 rEPC,大鼠內皮祖細胞-骨髓 RN-c, 大鼠皮質神經元 RN-s, 大鼠紋狀體神經元 RSC, 大鼠雪旺細胞 RA, 大鼠星形膠質細胞 RLF, 大鼠淋巴成纖維細胞 rRTEC, 大鼠腎小管上皮細胞 rCSC, 大鼠心肌細胞 RDFs, 大鼠真皮成纖維細胞 RLFs, 大鼠肺成纖維細胞 rCF, 大鼠心臟成纖維細胞 MN-h, 小鼠海馬神經元 MN-s, 小鼠紋狀體神經元 mOPC, 小鼠少突膠質前體細胞 MA, 小鼠星形膠質細胞 MLF, 小鼠淋巴成纖維細胞 mRTEC, 小鼠腎小管上皮細胞 CSC, 小鼠心肌細胞 小鼠骨髓間充質干細胞(BMSCs) MEF, 小鼠胚胎成纖維細胞
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