檸檬酸合酶(CS)測(cè)試盒操作步驟:
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔,在di一、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl,然后在di一、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后從di一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為180 ng/L,120 ng/L ,60 ng/L,30 ng/,15 ng/L)。 2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。 3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。 4. 配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。 5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。 6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。 7. 溫育:操作同3。 8. 洗滌:操作同5。 9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘. 10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。 11. 測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘。 大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞 HUVEC, 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞 人臍動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞 人臍靜脈平滑肌細(xì)胞 人臍動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞 人臍帶血單個(gè)核細(xì)胞 小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(EGFP標(biāo)記) 人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(hMSCs) 人間充質(zhì)干細(xì)胞-脂肪 人間充質(zhì)干細(xì)胞-肝 人間充質(zhì)干細(xì)胞-臍帶 小鼠神經(jīng)干細(xì)胞 小鼠海馬神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞(EGFP標(biāo)記) 小鼠皮層神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞(EGFP標(biāo)記) 小鼠神經(jīng)干細(xì)胞(EGFP標(biāo)記) 人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞 人腦血管平滑肌細(xì)胞 人海馬神經(jīng)元 人少突膠質(zhì)細(xì)胞 人星形膠質(zhì)細(xì)胞 小鼠成纖維細(xì)胞(EGFP標(biāo)記) mCF, 小鼠心臟成纖維細(xì)胞 MN-c, 小鼠皮質(zhì)神經(jīng)元 MN-h, 小鼠海馬神經(jīng)元 MSC, 小鼠雪旺細(xì)胞 MA, 小鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞 MLF, 小鼠淋巴成纖維細(xì)胞 mRTEC, 小鼠腎小管上皮細(xì)胞 CSC, 小鼠心肌細(xì)胞 mEPC, 小鼠內(nèi)皮祖細(xì)胞-骨髓 MEF, 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞 NSC,大鼠神經(jīng)干細(xì)胞 RN-h, 大鼠海馬趾神經(jīng)元 rEPC,大鼠內(nèi)皮祖細(xì)胞-骨髓 RN-c, 大鼠皮質(zhì)神經(jīng)元 RN-s, 大鼠紋狀體神經(jīng)元
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