普氏立克次體(RP)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)標(biāo)準(zhǔn)操作步驟：

1.液氮充分研磨樣品。

2.收集研磨成粉末的50mg樣品，置于1.5ml離心管中。

3.加入350μl65℃預(yù)熱的緩沖液IL，并加入20μl蛋白酶K劇烈地漩渦振蕩，確保所有的組織團都分散均勻。

4.65℃水浴20-30min。水浴期間顛倒樣品數(shù)次。

5.加入350μl，充分混勻，12,000 rpm(~13,400×g)離心5分鐘。

6.小心地把上清液吸至另一新的1.5ml離心管中。注意確保不要打散沉淀團或把組織碎片也一起轉(zhuǎn)移。

7.加入4μl RNase A，渦旋混勻。室溫放置2min。

8.加入二分之一上清體積的緩沖液IB與等體積的無水乙醇，充分混勻。如：向300μl上清中加入150μl緩沖液IB與300μl無水乙醇。

9.把上述混勻的液體轉(zhuǎn)移到吸附柱上。10,000×g離心1 min以結(jié)合DNA，棄去濾出液體。純化柱*容量為750μl,如果混合液大于750μl,請分兩次過柱。

10.將吸附柱重新套回收集管中，加入500μl緩沖液WB至柱子中，10,000×g離心1min,倒棄流出液；

11.將吸附柱重新套回收集管中，加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中，10,000×g離心1min,倒棄流出液；

注意：DNA Wash Buffer使用前須按要求用無水乙醇稀釋。如果放入冰箱中，使用前須恢復(fù)到室溫。

12.再加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中，8,000×g離心1min,棄去流出液；

13.將吸附柱重新套回2ml收集管中，轉(zhuǎn)速（>13000×g）離心空結(jié)合柱1min以干燥柱子的基質(zhì)；這一步對下面的洗脫步驟至關(guān)重要。

14.將柱子置于1.5ml滅菌離心管，加入50-150μl65℃預(yù)熱的洗脫緩沖液EB至柱子的膜中央。室溫靜置5min；

15. 室溫下，離心(>13000)1min，以洗脫DNA。保留含DNA的流出液。將DNA儲于-20℃。

產(chǎn)品僅用于科研如非指出，所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。

黑人Burkitt淋巴瘤細(xì)胞；RAJI

人B淋巴細(xì)胞瘤細(xì)胞；RAMOS

人B淋巴細(xì)胞瘤細(xì)胞；RAMOS(RA.1)

人腦瘤細(xì)胞；SF126

人腦瘤細(xì)胞；SF763

人腦瘤細(xì)胞；SF767

人皮膚黑色素瘤細(xì)胞；SK-MEL-1

人腎上腺皮質(zhì)癌細(xì)胞；SW-13

人結(jié)直腸癌細(xì)胞；T84

人急性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞；THP-1

人神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞；U251

人組織細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞；U937 [U-937]

人胃腺癌細(xì)胞；BGC-823

人低分化肺腺癌細(xì)胞；GLC-82 [GLC82]

人喉癌上皮細(xì)胞；Hep-2

人纖維肉瘤細(xì)胞；HT-1080

人絨癌細(xì)胞；JEG-3

人耐VP16絨癌細(xì)胞株；JEG-3/VP16

白介素-2轉(zhuǎn)染耐VP16絨癌細(xì)胞；JEG-3/VP16-IL-2

TNFa轉(zhuǎn)染耐VP16絨癌細(xì)胞；JEG-3-VP16-TNFa

人急性T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞；Jurkat, Clone E6-1

人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞；BE(2)-M17

人乳腺癌細(xì)胞；MDA-MB-157

人成骨肉瘤細(xì)胞；MG-63

人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞；NCI-H446

人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞；RPMI-8226 [RPMI8826]

人腦瘤細(xì)胞；SF17