其他熒光物質

1．酶作用后產生熒光的物質某些化合物本身無熒光效應，一旦經酶作用便形成具有強熒光的物質。例如4-甲基傘酮-β-D半乳糖苷受β-半乳糖苷酶的作用分解成4-甲基傘酮，后者可發出熒光，激發光波長為360nm，發射光波長為450nm。其他如堿性酸酶的底物4-甲基傘酮磷酸鹽和辣根過氧化物酶的底物對羥基苯乙酸等。

2．鑭系螯合物某些3價稀土鑭系元素如銪（Eu3+）、鋱（Tb3+）、鈰（Ce3+）等的螯合物經激發后也可發射特征性的熒光，其中以Eu3+應用zui廣。Eu3+螯合物的激發光波長范圍寬，發射光波長范圍窄，熒光衰變時間長，用于分辨熒光免疫測定。免疫學基本常識：抗原、抗體及單克隆抗體　*，人或動物可以依靠自身的能力抵御某些疾病的侵襲，也有一些疾病可以通過機體自身調控而自愈，這是因為機體內部存在一個免疫系統。免疫系統是由中樞免疫組織（骨髓、胸腺、消化系統免疫組織）和外周淋巴組織（淋巴結和脾臟）的免疫活性細胞（B淋巴細胞、漿細胞），以及由它們產生的多種淋巴因子和抗體所組成。

    免疫系統對外來物質產生一系列反應的過程稱為免疫，而這種反應本身則稱為免疫應答。能夠在機體 中引起特異性免疫應答的物質稱為抗原，免疫應答的結果則是刺激機體產生與抗原相對應的特異性抗體和引起細胞免疫。由于免疫應答同時取決于機體，而不僅是進入機體的物質，所以抗原的定義是相對的。由此，按照免疫應答的效果可以將抗原分為*抗原和半抗原：*抗原是指能夠直接誘導機體產生特異性免疫應答的一類物質。

    *抗原的分子量都大于5000，其化學成分多為蛋白質或脂多糖，其它如脂蛋白，糖蛋白，多糖體，多肽，核酸等也都是*抗原。半抗原能與抗體特異性結合，但不能激發機體產生抗體，必須與蛋白質（載體）結合后進入機體，才能產生有效的免疫應答。大分子的半抗原在體外能與對應的抗體結合發生可見反應（凝集、沉淀），小分子的半抗原能與對應抗體結合而不出現可見反應。此外，抗原還可以按照自身的物質屬性分為可溶性（毒素、異種蛋白）或顆粒性（細菌、細胞）抗原，或按臨床意義分為外源性和內源性抗原。

    抗體是在抗原刺激下機體免疫應答的產物。所有抗體都具有與抗原特異性結合的能力。抗體的化學本質是免疫球蛋白即γ－球蛋白。不過只有當免疫球蛋白針對已知抗原時，才能夠稱這種免疫球蛋白為抗體。免疫球蛋白屬于結構牢固的分子物質，可以經受較大變化的環境作用，諸如56℃加溫，在室溫下較長時期的貯藏，短期高或低pH處理，甚至與去污劑或尿素接觸后仍保持其抗體活性。抗體活性是指與抗原特異性結合的能力，即二者之間的特殊親合力。兩者非共價鍵結合，結合的力包括氫鍵，靜電力，范德華力和疏水結合力。

    抗體抗原之間的反應是可逆的，在適宜的條件下仍可解離而性質不變。機體內約有1億種不同的B淋巴細胞，每個獨立的B淋巴細胞只能接受一種抗原的刺激從而形成分泌一種抗體的能力，因此特異性是免疫應答的*標志。如常識所見，麻疹患者愈后即獲得對麻疹的終生免疫，而這并不形成對天花的免疫。抗體抗原特異性結合的本質是抗原決定簇與抗體結合簇的專一適配性，抗原決定簇是指抗原分子上專有的化學基因，可以決定其刺激機體所產生抗體的特異性。

    抗原決定簇與其相對應的抗體結合簇立體構型*相適應。一個抗原分子可帶有多個不同的決定簇。抗原分子量愈大，決定簇數量愈多。決定簇數目代表抗原分子的價。抗體結合簇是在抗體分子上與對應的抗原決定簇發生特異性結合的部位，位于Ig分子的抗原結合分段（V段）上，由重鏈和輕鏈的一部分可變區構成。其特異性由氨基酸排列順序決定，約包括5～15個氨基酸。每個單體免疫球蛋白分子如IgG有2個結合簇，IgA是二聚體，有4個結合簇，IgM是五聚體所以有10個結合簇。正常情況下，抗體與抗原在機體內結合后，可以被吞噬、排泄而將抗原清除。如果這種抗原屬于外源性致病抗原（細菌、病毒、毒素），可以由此達到殺滅或削弱抗原危害的目的。

    對于內源性抗原，如已經衰退、損傷或突變的異常細胞，也能被及時排除，實現機體自身的免疫調控。當然，在異常情況下，抗體抗原結合后形成的免疫復合物將損傷組織、細胞，引起花粉過敏一類的變態反應或免疫性疾病等不良后果。不過長期以來所謂特異性免疫血清抗體，不論是從人還是從動物獲得的，也不論是主動獲得還是被動獲得的，實際上都是有許多種具有不同特性的抗體所組成的混合抗體。這是因為，進入機體的抗原往往帶有若干個抗原決定簇。此外，不同個體對同一抗原決定簇的反應并不相同，即使同一個體不同時間接受抗原刺激后產生的反應也不*一致。

    由于人們無法將體內已受抗原刺激的各種不同的B淋巴細胞克隆區分開，即使在體外能將它們分成單細胞，也無法讓其繼續生長，增殖并分泌抗體。因此，用常規免疫方法制備的免疫血清抗體只能是數目眾多的單克隆抗體的混合物，現在，一般稱其為多克隆抗體（PcAb）。這種多克隆抗體存在特異性差、效價低、數量有限、動物間個體差異大，難以重復制備等固有缺陷，許多場合下使用時難盡人意。1975年，英國劍橋大學分子生物學研究室的Kohler和Milstein合作發表了題為“分泌預定特異性抗體的融合細胞的持續培養"的論文（Nature,256:495,1975）。他們將已適應于體外培養的小鼠骨髓瘤細胞與綿羊紅細胞免疫小鼠脾細胞（B淋巴細胞）進行融合，發現融合形成的雜交瘤細胞具有雙親細胞的特征：即像骨髓瘤細胞一樣在體外培養中能夠無限地快速增殖，又能持續地分泌特異性抗體，通過克隆化可使雜交細胞成為單純的細胞系，由此單克隆系就可以獲得結構與各種特性*相同的高純度抗體，即單克隆抗體（McAb）。