組織處理

恰當的組織處理是做好免疫組化染色的先決條件，也是決定染色成敗的內部因素，在組織細胞材料準備的過程中，不僅要求保持組織細胞形態完整，更要保持組織細胞的抗原性不受損或彌漫，防止組織自溶。如果出現自溶壞死的組織，抗原已經丟失，即使用很靈敏的檢測抗體和高超的技術，也很難檢出所需的抗原，反而往往由于組織的壞死或制片時的刀痕擠壓，在上述區域易出現假陽性結果。

1、組織及時取材和固定  組織標本及時的取材和固定是做好免疫組化染色的關鍵*步，是有效防止組織自溶壞死，抗原丟失的開始，離體組織應盡快的進行取材，2 h內，取材時所用的刀應銳利，要一刀下去切開組織，不可反復切拉組織，造成組織的擠壓，組織塊大小要適中，一般在2.5 cm×2.5 cm×0.2 cm，切記取材時組織塊寧可面積大，千萬不能厚的原則，(也就是說組織塊的面積可以大到3 cm×5 cm，但組織塊的厚度千萬不能超過0.2 cm，否則將不利于組織的均勻固定)。固定液快速滲透到組織內部使組織蛋白能在一定時間內迅速凝固。從而完好的保存抗原和組織細胞形態。

對于固定液的選擇，原則上講，應根據抗原的耐受性來選擇相應的固定液，但除非是專項科研項目，在病理常規工作很難做到這一點，因為病理的診斷和鑒別診斷都是在常規HE病理診斷的基礎上決定是否進行免疫組化的染色，而HE染色的常規組織處理是采用10%的中性緩沖福爾馬林或4%緩沖多聚甲醛4倍于組織體積進行組織固定，利用其滲透性強，對組織的作用均勻進行固定，但組織固定時間在l2 h內，一般固定時間不應超過24 h。隨著固定時間的延長對組織抗原的檢出強度將逐漸降低。

2、組織脫水、透明、浸蠟  組織經固定后進行脫水、透明、浸蠟和包埋。掌握的原則是脫水透明要充分但不能過，浸蠟時間要夠，溫度不能高，否則造成組織的硬脆使組織切片困難，即使能切片，由于組織的硬脆，也使切片不能完好平整，染色過程中極易脫片，對免疫組化染色抗原的定位及背景都不利，所以*脫水和二甲苯透明的時間不宜過長，正常大小的組織*脫水l h×3次，二甲苯透明l h×2次即可，浸蠟及包埋石蠟溫度不要超過65 ℃。細胞