ELISA試劑盒的研究和實驗原理

ELISA試劑盒方法被廣泛應用于各種抗原和抗體測定，具有靈敏度高，操作簡單等優點，但是在具體實驗過程中影響因素較多，并且要按照嚴格的說明要求，在臨床檢驗中除正常反應外，有時常可見到一些錯誤結果（即假陽性或假陰性結果）。

    引起ELISA試劑盒測定錯誤結果的原因主要有：①標本因素；②試劑因素；③操作因素。本文就標本因素對ELISA測定的影響做如下討論。
（1）類風濕因子
人血清中IgM、IgG型類風濕因子（RF）可以與ELISA系統中的捕獲抗體及酶標記二抗的FC段直接結合，從而導致假陽性。ELISA檢測試劑盒解決該情況的辦法是：①用F（ab）2替代完整的IgG；②標本用聯有熱變性（63℃，10 min）IgG的固相吸附劑處理（將熱變性IgG加入到標本稀釋液中同樣有效）；③檢測抗原時，可以用2-巰基乙醇等加入到標本稀釋液中，使RF降解。
（2）補體
ELISA系統中固相一抗和標記二抗過程中，抗體分子發生變構，其FC段的補體C1q分子結合位點被暴露出來，使C1q 可以將二者連接起來，從而造成假陽性。解決的辦法是：①用EDTA稀釋標本；②用53℃，10 min或56℃，30 min加熱血清使C1q滅活。
（3）嗜異性抗體
人類血清中含有能與嚙齒類動物（如鼠等）Ig （s） 結合的天然嗜異性抗體，可將ELISA系統中一抗和二抗連接起來，也能造成假陽性。解決的辦法是：可在標本稀釋液中加入過量的動物Ig （s） ，但加入量不足或亞類不同時無效。
（4）嗜靶抗原的自身抗體
抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等嗜靶抗原的自身抗體，有時能與靶抗原結合形成復合物，在ELISA方法中均可干擾抗原抗體測定結果。為避免以上情況出現，解決的辦法是：測定前需用理化方法將其解離后再測定。

（5）交叉反應物質

類AFP樣物質等，是與靶抗原有交叉反應的物質。在用多抗測定抗原時對測定結果影響不大，但在用單

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